分光光度计的原理

分光光度计，又称光谱仪(spectrometer)，是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200～380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380～780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。

一、基本简介

1、光度定义

分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区(2)400～760nm的可见光区，(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

紫外分光光度计与可见光分光光度计的区别

紫外可见分光光度计与可见分光光度计的区别是测定波长范围不同，紫外一般用氢灯，测定波长范围180～350nm,可见一般用钨灯，测定波长范围320～1000nm。

所谓紫外可见分光光度计也就是说这个仪器可以更换光源，能够测定吸收峰在紫外和可见光部分的化合物。发现吸光度超过2，便不再显示，是正常现象。吸光度是透光率的负对数，吸光度超过2就是说透光率小于1％，低于仪器的检出限，就不再显示了。至于能不能用分光光度计，取决于你测定的波长。

2、仪器组成

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白。

定量以及细菌生长浓度的定量。

仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。

3、光谱范围

包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200～400 nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源.

钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的400～760nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红橙，黄绿，蓝靛，紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源.

氢灯（或氘灯）的发射光谱：氢灯能发出185～400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源.

物质的吸收光谱(1)

如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液，此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱，它出现了几条暗线，即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失，这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱.

不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱，可以鉴别溶液中所含的物质.

物质的吸收光谱(2)

当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散，一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液.

入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光

如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射，分散等因素造成的入射光的损失则：

入射光 = 吸收光 十 透过光

二、分类方式

1.分光光度计按照波长及应用领域的不同可以分为：

（1）可见光分光光度计：测定波长范围为400～760 nm的可见光区；

（2）紫外分光光度计：测定波长范围为200～400nm的紫外光区；

（3）红外分光光度计：测定波长范围为大于760nm的红外光区；

（4）荧光分光光度计：用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱；

（5）原子吸收分光光度计：光源发出被测的特征光谱辐射，被经过原子化器后的样品蒸气中的待测元素基态原子所吸收，通过测定特征辐射被吸收的大小，来求出被测元素的含量。

2.分光光度计按自动化程度分类：可分为手动、半自动、自动分光光度计。

3.分光光度计按软件可分为：带扫描、不带扫描。

上海让奇仪器科技有限公司是专供紫外可见分光光度计、紫外分光光度计、分光光度计等实验室分析仪器的研发、设计、生产及销售的厂家和经销商。产品有G9系列双光束扫描型紫外可见分光光度计、D8系列准双光束扫描型紫外可见分光光度计、D7比例监测双光束紫外可见分光光度计、T6系列紫外可见分光光度计、K5系列可见分光光度计等G、D、T、K四大系列。